В настоящее время этот храм является хранителем главной святыни Русского народа и Российского государства – Чудотворного Образа Владимирского Пресвятой Богородицы.
С 1851 г. участок храма Святителя Николая Угодника в Толмачах стал соседним с участком городской усадьбы П.М.Третьякова – московского купеческого головы и основателя легендарной Третьяковской Галереи, который выступил меценатом крупных работ в храме в 1856 – 1858 гг.
Чудотворный Образ Владимирской Пресвятой Богородицы Матери Божьей Девы Марии был принесен из Владимира в Москву в 1395 г. во время похода на Северо-Восточную Русь среднеазиатского полководца Тимура (Тамерлана). Благодаря заступничеству Чудотворного Образа Северо - Восточная Русь была спасена от разгрома: дойдя до р. Оки, Тамерлан повернул назад, в Среднюю Азию. Чудотворный Образ Владимирской Пресвятой Богородицы Девы Марии был установлен в кафедральном митрополичьем (позднее – патриаршем) Успенском Соборе Московского Кремля, в котором находился до 1918 г. В 1918 г. Чудотворный Образ был передан в Исторический музей, в 1927 г. – в Третьяковскую галерею.